柒夜主持的cv歌会:谁能帮我设计一个植物诱变以及RAPD分析实验

植物诱变以及RAPD分析实验设计———
小麦的化学诱变及分析
一. 实验原理：
诱变育种是人为的措施诱导植物遗传基因产生变异，然后在产生变异的植株中按照需要选育出新的优良品种。诱变育种常用的有物理因素和化学因素，物理因素如各种射线、微波或激光等处理诱变材料，习惯上称之为辐射育种；化学因素是运用能导至遗传物质改变的一些化学药物——诱变剂处理诱变材料促使变异，常称之为化学诱变。
化学诱变剂种类现已不少，但常见使用效果较好的有：甲基磺酸乙脂（EMS，又称乙基甲烷磺酸盐）、乙烯亚胺（EN）、硫酸二乙脂（DES）、亚硝基尿烷（NEU）、亚硝基甲基尿烷（NMU）、亚硝基乙基脲（NEH）。以及从植物中提取的某些生物碱类（如长春花碱、秋水仙碱、石蒜碱等）。
诱变材料：在农业育种上，诱变剂常用来处理种子、营养体、花粉等。以选用种子为诱变材料最多。
诱变剂的浓度以多高为合适，还需要更多的实验次数才能确定。开始实验时应设立不同浓度的很多档次，以便以后总结优选配方。处理时间一一般约1小时至两昼夜，应掌握温度高则浓度偏低，浓度高则处理时间缩短的原则进行。诱变剂处理时的温度以20——25度为适。处理时间过长、温度过高、诱变剂过浓会造成大量死苗。
诱变剂大多具有致癌作用，操作时尽量少接触皮肤，更不能吸人体内。
RAPD是随机扩增多态性DNA（Random Amplification Polymorphic DNA）的英文缩写，RAPD是1990年由Willianms发明的，是新近发展起来一种分子生物学方法，RAPD是建立在PCR技术之上的一种分子标记方法，它是以一系列不同的随机排列的寡聚核酸单链为引物，对于所研究的基因组DNA 进行扩增，扩增产物通过聚丙烯酰氨凝胶或者琼脂糖凝胶电泳分析，经EB染色来检测扩增产物的多态性，RAPD 所使用的引物各不相同，对于任一特定的引物，它同基因组DNA 序列有特定的结合位点，这些特定的结合位点在基因组某些区域内的分布符合PCR反应的条件，机随机引物在模板的两条链上有互补的位置，且引物的3‘-端相距在一定的长度范围之内，就可以扩增出来DNA片段，如果基因组在这些区域发生DNA的片段的插入或者缺失，或者碱基突变就能够导致这些特定结合位点分布发生变化，而使PCR产物增加或者减少，发生分子量的变化，通过对于PCR产物的检测分析即可以测出基因组在这些区域的多态性。
RAPD技术继承了PCR技术的优点，所以RAPD技术可以在对于所研究的物种没有任何分子生物学基础的情况下，对其进行DNA的多态性的分析，同RFLP，DNA 指纹图谱法等其它DNA 多态性技术相比，RAPD 具有检测效率高，样品用量少，灵敏度高等特点和优势，RAPD已经广泛地应用于农作物品种以及品系的鉴定品种和品系的遗传关系的确定，基因的定位和分离 ，够建基因图谱以及作物抗性育种等方面。

二. 实验目的：
1.学习基因组的诱变方法；
2.掌握RAPD以及PCR检测方法。
三. 实验材料以及试剂：
1实验材料：
小麦种子
2 . 试剂
诱变剂：
4种DNTS ，随机引物，TAQ酶，

四. 实验步骤
（一）化学诱变（材料为每1组）
将饱满的小麦种子选取500粒，250 进行EMS处理，250直接进行培养。
具体为：1. 配置浓度为0.1%-0.3%的EMS
2. 将小麦种子用EMS处理两昼夜，处理过程当中温度保持在室温，处理时间不要过长，保证种子没有出现诱变致死。可以将种子浸泡在水中，在温箱中培育，如果诱变的种子出芽率低，进行再次诱变。如果诱变成功，将出芽的种子继续培养。同时，培育正常的种子.
（二）诱变后的种子和为诱变的种子培育到叶片生长到约8厘米左右可以进行下一步实验.
（三）植物总DNA的提取
1.样品制备：
取1克新鲜的小麦叶片（绿色的叶片最佳），加液氮研磨样品至粉末状
2.样品移入50ml的离心管，加入20---25ml已预热到65度的提取液，充分混匀，65度水浴20---30分。
3.将材料冷却到室温，加入16ml氯仿：异戊醇均匀混合，直至上层为绿色。
4.6000离心15分钟，加入预冷的无水乙醇，将离心后的样品上清夜缓慢许旋转加入，静置。DNA浮出。
5.用预冷-20的70%酒精洗涤DNA多次。将DNA勾出，吸出多余酒精，晾干。
（四）结果分析