下水道的老鼠多吗:有关IDA树脂的问题

来源：百度文库 编辑：高校问答 时间：2024/04/30 02:42:52
最近我在用IDA树脂纯化蛋白，在柱再生的时候我遇到了一个问题。我用盐酸胍洗脱后，可能是盐酸胍没有冲净，就直接上了SDS，结果盐酸胍和SDS反应了，产生了很多白色的絮状沉淀，真个柱子已经堵塞了。请问各位高手，怎么办啊？

去除核酸的最简单有效快速的办法就是 使用核酸酶 “非限制性核酸酶内切酶” 可以迅速 有效 彻底。该产品有进口和国产的。目前国产的 Biolonase 比较便宜，应该适合您这方面的使用。

重新做.

用稀硫酸泡一会

Novagen的蛋白亲和纯化产品
（2005年6月30日前75折促销）

His.Bind 纯化试剂盒
通过金属螯合层析纯化 His.Tag 融合蛋白

His.Bind 家族产品提供了用于通过固定化金属亲和层析（ IMAC ）快速一步纯化 His.Tag 序列蛋白的广泛填料选择。 His.Tag 序列（ 6 、 8 或 10 个连续的组氨酸残基）与固定在基于 NTA- 和 IDA- 的 His.Bind 树脂上的二价阳离子 Ni 2+ 结合，洗去未结合蛋白后，用咪唑或 pH 稍低的缓冲液洗脱并回收目标蛋白。该通用系统使得可在温和、非变性条件，或存在 6M 胍或尿素条件下纯化蛋白。

下表所列的不同 His.Bind 填料满足了许多融合蛋白纯化的应用：方便处理多个小量样品的纤维素柱和筒，用于成批制备和重力流柱子的大包装的操作简易的琼脂糖，处理时间短、快速纯化多个样品的 His.Bind 磁性琼脂糖珠，以及适合生产级纯化的高流速 Superflow TM 和 Fractogel 树脂。还有多种带 Ni 2+ （ NTA 或 IDA 化学基团）的填料可供选择。

His.Bind 基质选择指南

产品
类型
载量
特点
应用

Ni-NTA His.Bind Resin
带 Ni 的 NTA 琼脂糖
5-10 mg/ml
最小的 Ni 2+ 浸出
与 20mM b -ME 相容
小到中量
重力流柱
推荐用于真核抽提物

Ni-NTA His.Bind Superflow
带 Ni 的 NTA 超流速琼脂糖
5-10 mg/ml
最小的 Ni 2+ 浸出
与 20mM b -ME 相容
高流速和压力
小量到生产级
FPLC 或重力流柱
推荐用于真核抽提物

His.Bind Resin
无 Ni 的 IDA 琼脂糖
8 mg/ml
可重复使用多次
与 His.Bind 缓冲试剂盒兼容
小到中量
重力流柱或批量模式

His.Bind Cloumn
带 Ni 的 IDA 琼脂糖
1.25 预装柱
10 mg/ 次
预装柱
与 His.Bind Quick 缓冲试剂盒兼容
方便的纯化
重力流柱

His.Bind Fractogel (S)
无 Ni
IDA 触须
甲酰化
>10 mg/ml
20 -40 m M 颗粒大小
高流速和压力
小量到生产级
FPLC 或重力流柱
高分辨率分离

His.Bind Fractogel (M)
无 Ni
IDA 触须
甲酰化
>10 mg/ml
40 -90 m M 颗粒大小
高流速和压力
小量到生产级
FPLC 或重力流柱

His.Bind Quick 300 Cartridge
带 Ni 的 IDA 纤维素
预装筒
0.5 mg/ 次
每端锁紧接口
与 His.Bind Quick 缓冲试剂盒兼容
注射器操作
真空多支管操作
快速纯化

His.Bind Quick 900 Cartridge
带 Ni 的 IDA 纤维素
预装筒
2 mg/ 次
每端锁紧接口
与 His.Bind Quick 缓冲试剂盒兼容
注射器操作
真空多支管操作
快速纯化

His.Bind Quick Cloumn
带 Ni 的 IDA 纤维素
预装柱
5 mg/ 次
每端锁紧接口
与 His.Bind Quick 缓冲试剂盒兼容
真空多支管操作
快速纯化多个样品

His.Bind Magnetic Agarose Beads
带 Ni 的 IDA 磁性琼脂糖
5 mg/ml
3 m 磁性琼脂糖珠
快速小量纯化
磁性分离
高通量操作

注：与任何纯化填料一样， His.Bind 树脂在接近结合载量时使用，可获得最好的分离效果

His.Bind 纯化试剂盒
NTA 和 IDA 化学基团

His.Tag /His.Bind 技术是根据与 His.Tag 序列相邻组氨酸和固定化金属离子（通常为 Ni 2+ ）的亲和力来进行纯化。金属离子被螯合到固相支持物共价结合的反应性基团上。最常用的螯合物包括氮川乙酸（ NTA ）和亚氨二乙酸（ IDA ），它们分别具有四个和三个与金属离子相互作用的位点。在天然和变性条件下，这两种化学基团为亲和填料和目标蛋白的结合、洗涤和洗脱条件提供了不同特性。实际应用中， NTA 的额外螯合位点使纯化过程中金属浸出最小，并与还原二硫键的 20mM b - 巯基乙醇相容。而存在其它螯合或还原成分时， IDA 树脂的高金属浸出率可导致纯化结果不甚理想；然而 IDA 填料具有可循环使用多次并不损失性能的优点。对于每种填料系统，可改变条件以优化特定系统表达的目标蛋白的纯化。通常做法是调整天然条件下洗涤和洗脱缓冲液的咪唑浓度，尽量减少非特异结合蛋白的共纯化。

His.Bind 柱

为了方便使用， His.Bind 柱预装了 1.25ml 柱床体积的 Ni 2+ 结合 His.Bind 树脂。柱子顶部和底部的特殊设计 (frit) 可以确保上样和走柱时缓冲液均匀流动，干扰最小。配合使用 BugBuster 和 Benzonase 核酸酶制备的细菌裂解物可获得较好效果。

His.Bind 和 His.Bind 快速缓冲液试剂盒

His.Bind 缓冲液试剂盒是一套经过预测试的缓冲液，用于 IDA 的 His.Bind 树脂金属螯合层析方便快速地一步纯化蛋白。试剂盒提供的溶液可用于 10 根 2.5ml 柱的 Ni 2+ 螯合、蛋白结合、洗涤和洗脱。除了不包括 8X Ni 2+ 结合缓冲液， His.Bind 快速缓冲液试剂盒与 His.Bind 缓冲液试剂盒的组分完全相同。（填料树脂以 Ni 2+ 结合形式提供）

Ni-NTA 缓冲液试剂盒

Ni-NTA 缓冲液试剂盒提供了一套方便的缓冲液，优化用于在Ni-NTA His.Bind 树脂上纯化 His.Tag 融合蛋白。这些磷酸缓冲液与His.Bind 缓冲液试剂盒中的基于 Tris 的溶液不同。试剂盒中提供了经过精细制备的 4X 浓缩液，用于特定的结合、洗涤和洗脱程序。

BugBuster Ni-NTA His.Bind 和 His.Bind 纯化试剂盒

BugBuster 蛋白抽提试剂是从大肠杆菌有效抽提可溶性蛋白的即用型溶液，避免了机械破碎操作。 BugBuster Ni-NTA His.Bind 和 His.Bind 纯化试剂盒整合了 BugBuster 试剂和用于方便制备可溶性细胞抽提物以及 His.Tag 融合蛋白亲和纯化的相应树脂。两个试剂盒都包括 Benzonase 核酸酶，用于降低粘度和 / 或从蛋白制备物中去除核酸。 BugBuster His.Bind 纯化试剂盒还包括层析缓冲液。

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His.Bind 纯化试剂盒
通过金属螯合层析纯化 His.Tag 融合蛋白

His.Bind 家族产品提供了用于通过固定化金属亲和层析（ IMAC ）快速一步纯化 His.Tag 序列蛋白的广泛填料选择。 His.Tag 序列（ 6 、 8 或 10 个连续的组氨酸残基）与固定在基于 NTA- 和 IDA- 的 His.Bind 树脂上的二价阳离子 Ni 2+ 结合，洗去未结合蛋白后，用咪唑或 pH 稍低的缓冲液洗脱并回收目标蛋白。该通用系统使得可在温和、非变性条件，或存在 6M 胍或尿素条件下纯化蛋白。

下表所列的不同 His.Bind 填料满足了许多融合蛋白纯化的应用：方便处理多个小量样品的纤维素柱和筒，用于成批制备和重力流柱子的大包装的操作简易的琼脂糖，处理时间短、快速纯化多个样品的 His.Bind 磁性琼脂糖珠，以及适合生产级纯化的高流速 Superflow TM 和 Fractogel 树脂。还有多种带 Ni 2+ （ NTA 或 IDA 化学基团）的填料可供选择。

His.Bind 基质选择指南

产品
类型
载量
特点
应用

Ni-NTA His.Bind Resin
带 Ni 的 NTA 琼脂糖
5-10 mg/ml
最小的 Ni 2+ 浸出
与 20mM b -ME 相容
小到中量
重力流柱
推荐用于真核抽提物

Ni-NTA His.Bind Superflow
带 Ni 的 NTA 超流速琼脂糖
5-10 mg/ml
最小的 Ni 2+ 浸出
与 20mM b -ME 相容
高流速和压力
小量到生产级
FPLC 或重力流柱
推荐用于真核抽提物

His.Bind Resin
无 Ni 的 IDA 琼脂糖
8 mg/ml
可重复使用多次
与 His.Bind 缓冲试剂盒兼容
小到中量
重力流柱或批量模式

His.Bind Cloumn
带 Ni 的 IDA 琼脂糖
1.25 预装柱
10 mg/ 次
预装柱
与 His.Bind Quick 缓冲试剂盒兼容
方便的纯化
重力流柱

His.Bind Fractogel (S)
无 Ni
IDA 触须
甲酰化
>10 mg/ml
20 -40 m M 颗粒大小
高流速和压力
小量到生产级
FPLC 或重力流柱
高分辨率分离

His.Bind Fractogel (M)
无 Ni
IDA 触须
甲酰化
>10 mg/ml
40 -90 m M 颗粒大小
高流速和压力
小量到生产级
FPLC 或重力流柱

His.Bind Quick 300 Cartridge
带 Ni 的 IDA 纤维素
预装筒
0.5 mg/ 次
每端锁紧接口
与 His.Bind Quick 缓冲试剂盒兼容
注射器操作
真空多支管操作
快速纯化

His.Bind Quick 900 Cartridge
带 Ni 的 IDA 纤维素
预装筒
2 mg/ 次
每端锁紧接口
与 His.Bind Quick 缓冲试剂盒兼容
注射器操作
真空多支管操作
快速纯化

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带 Ni 的 IDA 纤维素
预装柱
5 mg/ 次
每端锁紧接口
与 His.Bind Quick 缓冲试剂盒兼容
真空多支管操作
快速纯化多个样品

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带 Ni 的 IDA 磁性琼脂糖
5 mg/ml
3 m 磁性琼脂糖珠
快速小量纯化
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高通量操作

注：与任何纯化填料一样， His.Bind 树脂在接近结合载量时使用，可获得最好的分离效果

His.Bind 纯化试剂盒
NTA 和 IDA 化学基团

His.Tag /His.Bind 技术是根据与 His.Tag 序列相邻组氨酸和固定化金属离子（通常为 Ni 2+ ）的亲和力来进行纯化。金属离子被螯合到固相支持物共价结合的反应性基团上。最常用的螯合物包括氮川乙酸（ NTA ）和亚氨二乙酸（ IDA ），它们分别具有四个和三个与金属离子相互作用的位点。在天然和变性条件下，这两种化学基团为亲和填料和目标蛋白的结合、洗涤和洗脱条件提供了不同特性。实际应用中， NTA 的额外螯合位点使纯化过程中金属浸出最小，并与还原二硫键的 20mM b - 巯基乙醇相容。而存在其它螯合或还原成分时， IDA 树脂的高金属浸出率可导致纯化结果不甚理想；然而 IDA 填料具有可循环使用多次并不损失性能的优点。对于每种填料系统，可改变条件以优化特定系统表达的目标蛋白的纯化。通常做法是调整天然条件下洗涤和洗脱缓冲液的咪唑浓度，尽量减少非特异结合蛋白的共纯化。

His.Bind 柱

为了方便使用， His.Bind 柱预装了 1.25ml 柱床体积的 Ni 2+ 结合 His.Bind 树脂。柱子顶部和底部的特殊设计 (frit) 可以确保上样和走柱时缓冲液均匀流动，干扰最小。配合使用 BugBuster 和 Benzonase 核酸酶制备的细菌裂解物可获得较好效果。

His.Bind 和 His.Bind 快速缓冲液试剂盒

His.Bind 缓冲液试剂盒是一套经过预测试的缓冲液，用于 IDA 的 His.Bind 树脂金属螯合层析方便快速地一步纯化蛋白。试剂盒提供的溶液可用于 10 根 2.5ml 柱的 Ni 2+ 螯合、蛋白结合、洗涤和洗脱。除了不包括 8X Ni 2+ 结合缓冲液， His.Bind 快速缓冲液试剂盒与 His.Bind 缓冲液试剂盒的组分完全相同。（填料树脂以 Ni 2+ 结合形式提供）

Ni-NTA 缓冲液试剂盒

Ni-NTA 缓冲液试剂盒提供了一套方便的缓冲液，优化用于在Ni-NTA His.Bind 树脂上纯化 His.Tag 融合蛋白。这些磷酸缓冲液与His.Bind 缓冲液试剂盒中的基于 Tris 的溶液不同。试剂盒中提供了经过精细制备的 4X 浓缩液，用于特定的结合、洗涤和洗脱程序。

BugBuster Ni-NTA His.Bind 和 His.Bind 纯化试剂盒

BugBuster 蛋白抽提试剂是从大肠杆菌有效抽提可溶性蛋白的即用型溶液，避免了机械破碎操作。 BugBuster Ni-NTA His.Bind 和 His.Bind 纯化试剂盒整合了 BugBuster 试剂和用于方便制备可溶性细胞抽提物以及 His.Tag 融合蛋白亲和纯化的相应树脂。两个试剂盒都包括 Benzonase 核酸酶，用于降低粘度和 / 或从蛋白制备物中去除核酸。 BugBuster His.Bind 纯化试剂盒还包括层析缓冲液。

参考资料：www.pufei.com

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